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        随着科学技术的发展，液相色谱仪在化学分析工作中扮演了越来越重要的角色。液相色谱⌒　仪主要由贮液瓶、输液泵、进样器、色谱柱(包括柱温箱)、检测器和数据记录及处理装置组成。液相色谱仪的进样器可分为自动进样器和手动进样器两大类型。目前，手动进样器绝大多数都采用六通阀(见图1)。六通阀的优点是进样量可变范围大，进样量也较大，分析和制备通用；进样量由固定体积的定量管或微量注射器控制，重复性好，可达0．5％；耐高压，可直接在高压下把样品送入色谱柱，不需停流；如果装上电动或气动的驱动装置，可做到自动化进样。

        进行样品分析时，在样品进入六通阀后，样品中的某些成份由于环境条件(溶剂极性、pH等)的改变，会沉积于六通阀中。使用过一段间后，尤其是分析染料和饲料等样品的仪器，六通阀中往往沉积有大量以往样品的残留。在检定液相色谱仪时，由于色谱条件和分析样品时相差较大，这些残留物质可能会溶解，和检定用标准物质一起随流动相进入检测器，得到的色谱图上会出现杂质峰（见图2)，影响检定结果的准确性。

六通阀中沉积的残留成份对检定结果准确性的影响
        检定液相色谱仪是根据《JJG705．2002液相色谱仪检定规程》，用检定仪器的国家二级标准物质的保留时间和峰面积或峰高计算仪器的定性、定量重复性及最小检测浓度的。定性重复性检定的依据是在可复现的色谱条件下，某组份色谱峰的保留时间仅与该组份的理化性质有关，只要能够分辨出色谱峰尖，杂质峰的出现并不能改变其它被测组份的保留时间，不会影响定性重复性检定结果的准确性。定量重复性及最小检测浓度的检定的依据是通过检测器的物质量与检测器的响应信号成正比，定量重复复性及最小检测浓度检定结果的准确性取决于响应信号(即色谱峰面积或峰高)的测量结果的准确性。

        杂质峰的出现对色谱峰面积或峰高测量的影响取决于它和标准组份的色谱峰的分离情况。图3、图4为在不同峰高比、不同分离度Rs时的标准分离度曲线。图中每个峰上的黑点表示每个峰尖的真实位『置，在图3中可以看到，为准确测量峰高需要分离度为0．8，而图4中则要求分离度在1．0才能准确测量蜂高。关于分离度对峰高测量的影响，大致可以︼认为，较低的Rs值会导致峰高偏大，对小峰而言，偏大更多。若Rs=1．0，相对峰高变化从128／1到1／128，峰高测量准确度优于土3％。

        图5展示了在分离度Rs=1．0、不同峰高比时峰面积的测量误差。从中可以看出，小的分离度是如何影响峰面积测量的准确度的。一般而言，较大峰的测量误差远比较小峰的的测量误差小。比较峰高和峰面积测量这两类方法，分离度不良时，测量峰面积的误差比测量峰高大。若Rs=1．0，峰高比变化从128／1到1／128时，误差最大为3％。而峰面积测量在相同的误差水平下，峰高比变化大约从3／1到l／3。用峰面积定量比用峰高定量要求有更大的分离度。

        通过上文可以推得，在杂质峰不能与被测峰完全分离的情况下，只有杂质〓峰小于被测峰才能较好地保证定量重复性及最小检测浓度检定结果的准确性。

残留物质影响的解决办法
        为了保证液相色谱仪检定的准确可靠，必须在发现六通阀中存在影响∏检定的残留物质时，在尽可能短的时间内，冲洗六通阀除去残留物质。六通阀中残留物质的形成有很多凶素，但简单扼要地讲，就是由于被测溶液的环境条件改变了(如流动相的极性、酸度等)，使部份组份从溶液巾析出。因此，要消除残留物质，就要尽可能地用各种极性相差大的溶剂冲洗，尽量使各种残留物质都能溶解于冲洗剂中。
        为了充分地清洗六通阀必须了解六通阀的结构。六通阀的结构见图6、它主要由固定子、转子及定量管组成。图7是六通阀工作原理示意网，图中外圈大号的数字表示固定子的6个管路接口，内圈小号的数字表示转子的6个管路接口。装样时，同定子和转子的6个管路接口按编号一一对应连通，注射器针头(注射器是特制的平头针，图6右图)，穿过旋转铝合金陶瓷片与定量管人口严密接触，样品可直接进入定〖量管，多余样品通过连接6的管道排出(图7左图）。进样时，转动手柄，使阀心顺时针转动60°。此时管路的连接如图3右图所示，定量管接人液路，定量管内的样品在流动相推动下进入色谱柱（见图7右面)。

        仪器供应商会在仪器的附件中配备专用清洗注射器及针头(图8)。清洗方法是将专用针头顶住进样针孔，用注射器向针孔内连续地推人清洗溶剂，同时扳动手柄使转子在load位置(图1)上停片刻，再使转子转到inject位置上停片刻，重复多次，以除去六通阀死角的残留物质。如果六通阀有较多以前累积的残留物质，就需要在清洗的同时用检测器监■测，记录到沉积物被洗出的色谱图(图10)，一直洗到色谱图上不出现色谱峰为止。有时专用针头与针孔密封性不好，清洗溶剂不能进入六通阀，就采用仪器供应商所配的另一种进样针头(图9)进行清洗。这种针头规格和普通玻璃进样针相同，针头可以直接插到转子底端(图6)，使清洗溶剂能直接进入六通阀的死角。如果六通阀实【在太脏，不可能洗干净了，就再清洗几次，当杂质峰接近消失后连续重复进样，直到色谱¤图上杂质峰再度明显变大，再清洗几次，然后再连续重复进样。这个过程重复多次，直到得到足够的实验数据。

本文来源：姚颖 邱旸/上海市计量测试技术研究院

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